尽管FITC-COOH（Fluorescein-Carboxylic Acid）在细胞成像和定位研究中具有多种应用，但在实验设计和应用选择中存在一些限制。以下是一些常见的限制：

1. 细胞渗透性：FITC-COOH是一种相对较大的分子，其细胞渗透性可能受限。对于细胞内标记和成像，FITC-COOH可能需要使用特定的转染方法或载体来实现其在细胞内的引入。

2. 细胞毒性：某些细胞类型对FITC-COOH可能具有一定的毒性。在使用FITC-COOH进行实验时，需要对细胞毒性进行评估，并选择适当的浓度和处理时间，以确保对细胞的最小影响。

3. pH敏感性：FITC-COOH的荧光性质可能受到溶液pH的影响。在进行实验设计和荧光成像时，应注意维持适当的pH条件，以保证FITC-COOH的荧光性能的稳定性和准确性。

4. 光敏性：FITC-COOH在强光照射下可能会发生光降解，导致荧光信号的衰减。因此，在进行荧光成像时，应避免长时间或过强的光照射，以减少光降解的影响。

5. 选择性标记的挑战：FITC-COOH作为荧光染料，其与目标分子的选择性标记可能具有一定的挑战性。在标记蛋白质或其他生物分子时，需要设计适当的偶联方法和靶向策略，以确保FITC-COOH与目标分子的特异性结合。

在设计实验和选择应用时，需要考虑这些限制，并根据具体研究目标、细胞类型和实验条件进行优化和调整。此外，参考相关的文献，获取更多的使用建议和最新研究进展也是非常重要的。

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